檢測技術服務:體外結合實驗與免疫沉淀的區別--檢測技術服務詳情

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蛋白質體外結合實驗（即Pull-down實驗）和免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）是研究蛋白質相互作用的兩種方法，兩者存在一定區別又可互為驗證試驗。

免疫共沉淀實驗（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）與IP實驗一樣，兩者均是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。其原理是：當細胞在非變性條件下裂解時，體內存在的蛋白質利用抗體與抗原之間的親和性將互作蛋白保留下來。由于Co-IP在非變性實驗條件性進行，蛋白質之間的天然相互作用得以zuì大程度的保留，可以比較真實的反應蛋白質之間的相互作用，但這種相互作用并不能確定是直接的或是間接的。

蛋白質體外結合實驗，即Pull-down實驗，是一種行之有效的驗證酵母雙雜交系統的體外試驗技術。在Pull-down實驗中，常用谷胱甘肽巰基轉移酶（GST）融合蛋白Pull-down的方法來鑒定能與已知融合蛋白相互作用的未知蛋白質，也可以鑒定兩個已知蛋白質之間是否存在相互作用。但Pull-down的結果并不能真實的反應蛋白質之間的相互作用, 因為在活體內它們不一定在亞細胞空間上能碰到, 并不意味著在生理條件下一定結合。

Pull-down與Co-IP的原理是類似的, 都是利用親和配體來捕獲互作蛋白。不同的是，Pull-down是利用一個純化且含有標簽的蛋白作為誘餌來結合互作蛋白，一般用來證明蛋白之間直接的相互作用；而Co-IP則采用固定的抗體捕獲互作蛋白，用來證明2個蛋白之間的相互作用，但不排除通過第3個蛋白介導的間接相互作用。

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